牙髓干细胞（Dental Pulp Stem Cells, DPSCs）的采集是一个专业医疗操作，通常由牙医或口腔外科医生在拔除特定牙齿的过程中进行，以下是牙髓干细胞采集的主要方法和流程：
📍 核心原则
采集牙髓干细胞的核心是从健康或可利用的牙齿中获取含有牙髓组织的样本，然后在实验室中进行分离、培养和扩增，以获得足够数量的干细胞用于储存或研究。
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📍 主要采集来源
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健康恒牙（最常见）：
- 智齿（第三磨牙）： 这是最理想的来源之一，智齿通常在青少年或成年早期拔除（因正畸、阻生、龋坏、牙周病等原因），且拔除时牙髓通常是健康的。
- 正畸拔除的前磨牙/双尖牙： 在正畸治疗中，为了排齐牙齿或为其他牙齿腾出空间，有时需要拔除健康的双尖牙，这些牙齿的牙髓通常状态良好。
- 因其他原因拔除的健康前磨牙/尖牙： 如严重牙列拥挤需要减数拔牙，且拔除的牙齿本身牙髓健康。
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乳牙（年轻恒牙牙囊中的恒牙胚牙髓）：
当儿童换牙时,自然脱落的乳牙如果牙髓健康（通常指脱落前牙髓未发生感染或坏死），也可以作为来源，但乳牙牙髓量较少，采集难度相对大一些，且对脱落时间有严格要求（通常要求在脱落后短时间内处理）。
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外伤牙（特定情况）：
（图片来源网络，侵删）对于因外伤完全脱位或需要拔除的牙齿,如果能在短时间内（最好在体外干燥时间小于60分钟）进行再植或处理，且牙髓健康或可挽救（如年轻恒牙），也可作为来源，这种情况较少见且时效性强。
📍 采集方法与流程（以拔除智齿或正畸牙为例）
采集过程主要发生在拔牙手术中或拔牙后立即进行：
🦷 1. 患者评估与知情同意
- 评估： 医生会评估患者的口腔健康状况、拔牙指征、牙齿健康状况（通过临床检查、X光片判断牙髓是否可能健康），只有确认拔除的牙齿牙髓健康或具有采集价值，才会进行干细胞采集。
- 知情同意： 这是至关重要的一步。 医生必须向患者（或法定监护人，如果是未成年人）详细解释：
- 牙髓干细胞的性质、潜在用途（目前主要是储存和未来可能的临床应用研究）。
- 采集过程（在拔牙过程中进行）。
- 储存机构、储存期限、费用。
- 储存期间可能存在的风险（如储存失败、污染、细胞活性下降等）。
- 干细胞使用的伦理问题（如未来用于他人治疗需额外同意）。
- 患者有权选择是否采集和储存。
- 签署正式的干细胞储存知情同意书。
🦷 2. 术前准备
- 器械准备： 准备拔牙所需器械（高速手机、低速手机、各种拔牙钳、挺子、牙龈分离器等）、无菌器械包（用于后续牙髓组织处理）、无菌运输容器/培养液（如装有DMEM/F12培养基+抗生素+血清的离心管或专用冻存管）、冰盒（用于低温保存样本）。
- 环境准备： 确保拔牙室或手术室环境清洁，严格无菌操作。
🦷 3. 拔牙手术（采集核心步骤）
- 麻醉： 对患者进行局部麻醉（如利多卡因等）。
- 拔牙： 按照标准拔牙程序操作（如切开牙龈、去骨、挺松、拔除牙齿）。
- 获取牙齿： 将拔除的牙齿放入一个无菌容器中（如无菌纱布包裹或放入无菌培养皿）。关键：避免牙齿接触非无菌表面！
🦷 4. 牙髓组织分离（在拔牙后立即进行）
- 清洁牙齿： 用无菌生理盐水轻轻冲洗牙齿表面，去除血液、唾液和碎屑。避免用力冲洗或刮擦牙本质表面，以免损伤牙髓。
- 开髓：
- 在高速手机上安装无菌裂钻头。
- 在牙冠的颊舌侧或近远中侧（避开根管口），在牙釉质和牙本质上开一个足够大的洞（通常约1-2mm直径），直达牙髓腔，位置选择要确保能暴露整个牙髓组织。
- 取出牙髓组织：
- 使用无菌挖匙或显微根管器械（如锉），非常轻柔地从牙髓腔中完整或分块取出牙髓组织。
- 关键操作： 动作必须极其轻柔，避免用力拉扯、挤压或损伤牙髓组织，否则会降低细胞活性，最好在手术显微镜下操作，视野更清晰，操作更精细。
- 转移样本：
- 将取出的牙髓组织块立即放入装有预冷的（4°C左右）无菌运输培养基（如含抗生素的DMEM/F12 + 10% FBS）的无菌离心管或专用冻存管中。
- 密封容器，标记患者信息（姓名、病历号、牙齿编号、采集日期）。
- 将样本放入装有冰袋或冰块的低温容器中（通常维持在4°C左右），尽快（通常要求在拔牙后24-48小时内，最好在24小时内）运送至干细胞实验室进行处理。
🦷 5. 实验室处理（后续步骤，非采集本身）
- 运输： 样本由专人或专业冷链物流运送至干细胞储存或研究机构。
- 清洗： 在生物安全柜中，用无菌PBS或培养基清洗牙髓组织，去除血液和杂质。
- 消化： 使用胶原酶等酶类消化液，在37°C水浴中消化组织块，使细胞从细胞外基质中释放出来。
- 过滤与离心： 将消化液过滤（通常用70μm和40μm细胞筛），去除未消化的组织碎片，然后离心收集细胞沉淀。
- 培养与扩增： 将细胞接种于培养皿中，用专用培养基（含生长因子、血清等）进行培养，细胞贴壁生长后，传代扩增，获得足够数量的干细胞。
- 鉴定与冻存： 对扩增的细胞进行鉴定（如流式细胞术检测表面标志物如CD73, CD90, CD105阳性，CD34, CD45阴性等），确认其干细胞特性，然后加入冻存液，程序降温后放入液氮中长期储存（196°C）。
📍 关键注意事项
- 健康牙髓是前提： 只有牙髓健康（无炎症、坏死、感染）的牙齿才能采集到高质量的干细胞，有严重龋坏、根尖周炎或根管治疗的牙齿通常不适合。
- 无菌操作是生命线： 从拔牙到样本转移的每一个环节都必须严格无菌，否则会导致样本污染，细胞培养失败。
- 轻柔操作至关重要： 在取出和处理牙髓组织时，必须轻柔，避免机械损伤，以保护细胞活性和干细胞特性。
- 时效性要求高： 牙髓组织离体后，细胞活性会随时间下降，从拔牙到实验室处理的时间越短越好（lt;24小时），低温保存（4°C）能延缓活性下降。
- 专业团队： 整个采集、运输、处理和储存过程需要由经过专业培训的口腔外科医生、实验室技术人员和干细胞储存机构协作完成。
- 伦理与法规： 必须遵守国家关于干细胞研究、应用和储存的相关法律法规及伦理指南。
牙髓干细胞的采集是一个始于拔牙手术、终于实验室处理的流程，其核心是在拔除特定健康牙齿（最常见是智齿或正畸牙）的过程中，由专业医生在严格无菌和轻柔操作下，从牙髓腔中取出牙髓组织，并迅速在低温条件下运送至实验室进行后续的分离、培养、扩增和冻存，整个过程对技术要求高，需要患者知情同意和多方专业协作。💪🏻
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